大豆GmbZIP33基因啟動(dòng)子的克隆及瞬時(shí)表達(dá)分析
關(guān)鍵詞：大豆 擬南芥 gus 維管組織特異性啟動(dòng)子
摘要：啟動(dòng)子作為基因調(diào)控的重要元件,決定著下游基因表達(dá)的時(shí)空和強(qiáng)度特性。為研究大豆GmbZIP33基因啟動(dòng)子功能,在前期克隆獲得GmbZIP33基因(Glyma.03G219300.1)序列的基礎(chǔ)上,通過N-PCR(nested PCR)技術(shù)克隆了GmbZIP33 CDS上游啟動(dòng)子區(qū)序列(2 316 bp)。利用PlantCARE在線分析軟件進(jìn)行順式作用元件的預(yù)測,發(fā)現(xiàn)該序列上除含有TATA-box和CAAT-box等核心調(diào)控元件外,同時(shí)包括與抗逆、光響應(yīng)、激素響應(yīng)、蔗糖應(yīng)答元件和多個(gè)與組織特異性表達(dá)相關(guān)的元件。為研究GmbZIP33啟動(dòng)子的表達(dá)調(diào)控特性,構(gòu)建了該啟動(dòng)子調(diào)控報(bào)告基因GUS表達(dá)的載體,并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸染法將其轉(zhuǎn)入擬南芥中,發(fā)現(xiàn)該啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下的GUS基因在不同組織(蓮座葉、花、莢果和根)的維管束中均特異性表達(dá);對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),GUS基因在花中表達(dá)量最高,莢果中次之,表明GmbZIP33基因可能受到多種因素和蔗糖的調(diào)節(jié)并參與花莢發(fā)育的調(diào)控。
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