河川沙塘鱧GHR和IGF-2基因克隆及mRNA的時(shí)序表達(dá)
關(guān)鍵詞：河川沙塘鱧 ghr 基因克隆 mrna表達(dá)量
摘要：生長激素/胰島素樣生長因子-軸(growth hormone/insulin-like growth-axis,GH/IGF-軸)是調(diào)控魚類生長的主要內(nèi)分泌軸線。為探討生長相關(guān)基因GHR、IGF-2對(duì)河川沙塘鱧(Odontobutis potamophila)生長發(fā)育的調(diào)控機(jī)制,采用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù),對(duì)河川沙塘鱧的GHR、IGF-2基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)模式分析。研究結(jié)果顯示:河川沙塘鱧GHR基因的cDNA全長序列為2 179 bp,開放閱讀框?yàn)? 830 bp,共編碼609個(gè)氨基酸,IGF-2基因的cDNA全長序列為1 586 bp,開放閱讀框642 bp,共編碼213個(gè)氨基酸。采用qRT-PCR方法檢測(cè)了GHR、IGF-2基因在9個(gè)不同組織(腦、肝、心、肌肉、脾、腸、性腺、鰓、腎)和8個(gè)胚胎不同發(fā)育時(shí)期(受精卵期、桑椹胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、體節(jié)期、口裂期、出膜后1 d、出膜后3 d)的表達(dá)情況。結(jié)果表明:IGF-2和GHR基因在所檢測(cè)的9種組織中均有表達(dá),其中以肝臟、肌肉、性腺、腦中的表達(dá)量較高,在胚胎發(fā)育階段GHR和IGF-2基因表達(dá)呈先上升后下降的趨勢(shì),在原腸胚期表達(dá)量較高,表明其在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。qRT-PCR進(jìn)一步比較了雌、雄河川沙塘鱧GHR和IGF-2基因在不同生長發(fā)育階段(90、150、210、270、330 d)腦、肝、肌肉mRNA的表達(dá)量,結(jié)果表明:各時(shí)期雄魚GHR和IGF-2基因在肝組織中表達(dá)量均顯著高于雌魚,肌肉和腦GHR基因mRNA的表達(dá)量則無顯著差異。而IGF-2基因則僅在雌、雄魚210 d的腦和150、210 d的肌肉存在顯著性差異,推測(cè)肝GHR和IGF-2基因mRNA表達(dá)的雌雄差異是河川沙塘鱧雌雄生長差異的主要原因之一。
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