重組人溶菌酶在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達(dá)及活性研究
關(guān)鍵詞：人溶菌酶 重組蛋白 畢赤酵母 誘導(dǎo)表達(dá) 生物活性
摘要：為了構(gòu)建一種胞內(nèi)表達(dá)人溶菌酶(hLZ)的畢赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通過(guò)酶切位點(diǎn)插入畢赤酵母表達(dá)載體pPICZαA,獲得pPICZαA-hLZ。線性化該表達(dá)載體,電轉(zhuǎn)化并篩選陽(yáng)性克隆,甲醇誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)后,進(jìn)行純化和活性分析。結(jié)果表明,通過(guò)親和層析樹(shù)脂(Ni-IDA)從培養(yǎng)液上清純化目標(biāo)蛋白,SDS-PAGE表明目標(biāo)蛋白為14.7kDa左右,Western-blot結(jié)果表明目標(biāo)蛋白即為帶有6個(gè)His標(biāo)簽的重組人溶菌酶,BCA法測(cè)定表明純化后的蛋白濃度為0.121mg/mL;溶壁微球菌抑菌試驗(yàn)表明該重組人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地獲得了胞內(nèi)表達(dá)且具有部分生物活性的人溶菌酶畢赤酵母工程菌,為重組人溶菌酶作為飼料添加劑開(kāi)發(fā)應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。
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