熒光免疫層析技術(shù)定量檢測(cè)蓖麻毒素
關(guān)鍵詞：蓖麻毒素 熒光微球 免疫層析技術(shù)
摘要：為了建立免疫層析技術(shù)定量檢測(cè)蓖麻毒素試劑,首先依據(jù)蓖麻毒素對(duì)半乳糖的特異性結(jié)合能力,采用親和層析技術(shù)對(duì)蓖麻種子進(jìn)行親和層析純化;其次采用凝膠過(guò)濾層析技術(shù),獲得更純的天然蓖麻毒素純品;最后以天然的蓖麻毒素脫毒為免疫原,分別免疫獲得鼠抗相思中毒素單克隆抗體和兔抗蓖麻毒素多克隆抗體,利用獲得的鼠抗蓖麻毒素單克隆抗體作為標(biāo)記抗體,標(biāo)記羧基熒光微球(激發(fā)波長(zhǎng)365nm,發(fā)射波長(zhǎng)610nm)在NC膜上包被兔抗蓖麻毒素多克隆體作為檢測(cè)線(xiàn)、包被羊抗鼠IgG抗體作為質(zhì)控線(xiàn),建立蓖麻毒素雙抗體夾心定量檢測(cè)試劑,并對(duì)該試劑進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,純化后的蛋白經(jīng)SDS-PAGE處理后,分為分子量為65kDa左右的單條帶、分子量為31kDa左右的雙條帶和33kDa左右的雙條帶,分別為Ricin毒素A鏈和B鏈。用TotalLab2.0軟件分析純化率為96%;檢測(cè)試劑配合熒光免疫檢測(cè)儀在0~50ng/mL的檢測(cè)范圍時(shí),擬合曲線(xiàn)R2>0.990,線(xiàn)性范圍為1~10ng/mL,R2>0.990,最低檢出限為1ng/mL,且批間、批內(nèi)重復(fù)性均小于15%。此法特異性良好,常溫穩(wěn)定性14個(gè)月,樣本檢測(cè)能力良好,可在食品和環(huán)境中應(yīng)用蓖麻毒素進(jìn)行定量檢測(cè)。
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