缺氧微環(huán)境對宮頸癌Hela細(xì)胞HIF-1α及VEGF—A表達(dá)的影響
關(guān)鍵詞：缺氧微環(huán)境 宮頸癌 二氯化鈷
摘要：目的： 研究在缺氧微環(huán)境下人宮頸癌Hela細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）和血管內(nèi)皮生長因子A（VEGF-A）的表達(dá)。方法： 采用CoCl2構(gòu)建Hela細(xì)胞體外缺氧微環(huán)境模型，使用CCK8法來檢測細(xì)胞的增殖；使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別來檢測HIF-1α和VEGF-A mRNA表達(dá)的變化；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測HIF-1α和VEGF-A蛋白的表達(dá)。結(jié)果： CCK8檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CoCl2誘導(dǎo)的缺氧微環(huán)境能降低Hela細(xì)胞的增殖活性，隨著CoCl2濃度的增加其增殖活性逐漸降低，在150 μmol/L時(shí)降到最低，各濃度組間總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 10.118，P = 0.001，P 〈 0.05），在相同CoCl2濃度構(gòu)建的缺氧微環(huán)境中，隨著缺氧時(shí)間的延長，其細(xì)胞增殖活性逐漸降低，在12 h降至最低，而后增殖活性增加，各時(shí)間組總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 9.727，P = 0.002，P 〈 0.005）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)同對照組比較，缺氧處理3 h， HIF-1α和VEGF-A的mRNA表達(dá)無明顯差異（P = 0.86，P = 0.72，P ＞ 0.05）；隨著缺氧時(shí)間增加，HIF-1α的mRNA表達(dá)在12 h時(shí)達(dá)峰值，隨后下降，各時(shí)間組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 1.627，P ＜ 0.001）。VEGF-A mRNA表達(dá)隨著缺氧時(shí)間的增加逐漸增加，各時(shí)間組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 7.407，P ＜ 0.001）。HIF-1α和VEGF-A在mRNA表達(dá)水平上無相關(guān)性（r = 0.647，P 〉 0.05）；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，在150 μmol/LCoCl2構(gòu)建的缺氧微環(huán)境下，隨著時(shí)間延長HIF-1α蛋白表達(dá)逐漸增加，在12 h達(dá)到峰值，而后下降（F = 100.930，P 〈 0.001）；VEGF的蛋白表達(dá)隨時(shí)間延長而逐漸增加（F = 118.336，P 〈 0.001）。HIF-1α和VEGF-A在蛋白表達(dá)水平上呈正相關(guān)（r = 0.892，P 〈 0.05）。結(jié)論：CoCl2誘導(dǎo)的缺氧微環(huán)境能使Hela 細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)，促進(jìn)其下游靶基因VEGF-A在mRNA及蛋白水平表達(dá)升高。
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