樣品前處理對(duì)牛精子全蛋白質(zhì)組鑒定的影響
關(guān)鍵詞：牛精子 蛋白質(zhì)組學(xué) 樣品前處理 蛋白質(zhì)提取液 酶解方法
摘要：本文主要分析樣品前處理對(duì)牛精子全蛋白質(zhì)組鑒定的影響,文中對(duì)5種不同的蛋白質(zhì)提取液和3種不同的酶解方法進(jìn)行了系統(tǒng)地分析比較.5種蛋白質(zhì)提取液:溶液BS(4%SDS,0.1mol/L Tris-HCl,0.1mol/L DTT);溶液BU(8mol/L Urea,0.1mol/L Tris-HCl);溶液BT(7mol/L Urea,2mol/L Thiourea,0.1mol/L Tris-HCl,0.4%Chaps);溶液BR(購(gòu)自Thermo,貨號(hào)89901);溶液BD(2%SDC,50mmol/L NH4HCO3,25mmol/L NaCl).3種酶解方法:溶液內(nèi)酶解、膠內(nèi)酶解以及膜上酶解(FASP).實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:牛精子蛋白質(zhì)提取能力BS最強(qiáng),BU最弱;BT、BR以及BD相當(dāng).BS-FASP不適用于牛精子蛋白質(zhì)組學(xué)研究.膠內(nèi)酶解鑒定到的蛋白質(zhì)均多于FASP法,但是膠內(nèi)酶解操作過(guò)程復(fù)雜繁瑣,耗時(shí)長(zhǎng).基于BD的溶液內(nèi)酶解法鑒定到的蛋白質(zhì)數(shù)量最多,膜蛋白提取鑒定能力較強(qiáng),且操作時(shí)間最短,是較為理想的方法.
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