尼羅羅非魚MyD88基因的表達及多克隆抗體制備
張永德; 林勇; 潘傳燕; 馮鵬霏; 陳曉漢; 羅洪林 廣西水產(chǎn)科學研究院; 廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點實驗室; 廣西南寧530021
關鍵詞：羅非魚 myd88 原核表達 多克隆抗體
摘要：為體外表達尼羅羅非魚髓樣分化因子(MyD88)蛋白并制備抗該蛋白的多克隆抗體,采用無縫克隆技術將尼羅羅非魚MyD88基因轉入pET-B2m原核表達載體,并轉入大腸桿菌B21中誘導表達,將表達的MyD88蛋白經(jīng)純化后免疫大耳兔制備多克隆抗體,采用Western blot和ELISA檢測抗體的特異性和效價。試驗結果表明,本研究成功構建了pET-B2m-MyD88原核表達載體,誘導表達獲得了48.9 ku的重組蛋白,免疫大耳兔獲得效價為1∶2 048 000的抗尼羅羅非魚MyD88多克隆抗血清。Western blot檢測結果顯示,該抗體能夠特異性的識別原核表達的MyD88蛋白。原核表達體系的建立及多克隆抗體的制備為進一步研究MyD88蛋白在尼羅羅非魚先天性免疫中的功能奠定了基礎。
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