中國明對蝦calcineurin B基因的克隆及其在競爭行為中作用的初探
關(guān)鍵詞：中國明對蝦 競爭行為 鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶 基因克隆 表達(dá)分析
摘要：中國明對蝦在養(yǎng)殖中表現(xiàn)出較強(qiáng)的競爭行為,對其生長性能產(chǎn)生了較大的影響,然而,到目前為止其發(fā)生的分子機(jī)制尚不清楚。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin,CN)是高度保守的Ca2+/鈣調(diào)蛋白(calmodulin,CaM)依賴性絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶,由催化亞基(CNA)和調(diào)節(jié)亞基(CN-B)組成,是參與許多重要生理過程的多功能蛋白質(zhì)。CNB在Ca2+/CaM的介導(dǎo)下主要在動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮重要作用。另外,前期通過比較轉(zhuǎn)錄組分析篩選出的與中國明對蝦競爭行為相關(guān)的候選基因中包括CNB基因。為了進(jìn)一步明確CNB在中國明對蝦競爭過程中的作用,實驗通過RACE技術(shù)克隆了中國明對蝦CNB基因(FcCN-B)的全長cDNA序列,并利用Real-time PCR技術(shù)分析了其在高競爭能力組(HCG)和低競爭能力組(LCG)組間不同組織(神經(jīng)節(jié)、心臟、胃、肝胰腺和腸)中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,FcCN-B的cDNA全長序列為2867 bp,包括95 bp的5′非編碼區(qū)(UTR),540 bp的開放閱讀框(ORF),和2232 bp的3′UTR,其中ORF中具有4個保守的EF-hand Ca2+結(jié)合結(jié)構(gòu)域。蛋白質(zhì)同源性分析顯示,FcCN-B的氨基酸序列與其他物種具有較高的同源性(78.8%~93.8%),其中最高的是中華絨螯蟹(93.8%)和黑腹果蠅(90.5%);系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析顯示,脊椎動物和無脊椎動物分別獨立為一支,且中國明對蝦與中華絨螯蟹單獨聚為一支,之后與黑腹果蠅聚類關(guān)系最近,提示FcCN-B在中國明對蝦中可能具有與其在中華絨螯蟹和果蠅中相類似的功能。Real-time PCR定量結(jié)果顯示,FcCN-B在HCG組的神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)極顯著高于LCG組,而其在HCG組的心臟中的表達(dá)極顯著低于LCG組。研究結(jié)果表明,calcineurin B基因在中國明對蝦的競爭行為中可能發(fā)揮一定的作用,將為解析中國明對蝦競爭行為的分子機(jī)制奠定重要的基礎(chǔ)。
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