擬穴青蟹Cactus基因的cDNA克隆、序列及生物學(xué)功能
關(guān)鍵詞：擬穴青蟹 cactus 基因克隆 組織分布 表達(dá)分析
摘要：為獲取擬穴青蟹Cactus基因cDNA全長(zhǎng)、分析基本生物學(xué)信息,并初步探索其在病原物刺激下的免疫反應(yīng),實(shí)驗(yàn)采用RACE技術(shù)獲得了擬穴青蟹Cactus(SpCactus)基因的cDNA全長(zhǎng)序列,其cDNA全長(zhǎng)為2035 bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)1311 bp,編碼436個(gè)氨基酸,分子量為46.01 ku。對(duì)蛋白理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),SpCactus為親水性蛋白,等電點(diǎn)pI為4.91。經(jīng)預(yù)測(cè),SpCactus與其他物種的IκB蛋白具有相似的功能結(jié)構(gòu)域。同源性比對(duì)結(jié)果顯示,SpCactus與凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦的Cactus蛋白同源性均高達(dá)62%,相似度為73%。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析顯示,SpCactus與甲殼動(dòng)物聚為一支,與無(wú)脊椎動(dòng)物聚為一大支。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),SpCactus基因在擬穴青蟹不同組織中均有表達(dá),肌肉中的表達(dá)量最高,其次為心臟、眼柄、血液和鰓,肝胰腺中的表達(dá)量最低。LPS和金黃色葡萄球菌刺激均能顯著誘導(dǎo)SpCactus基因的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)成功擴(kuò)增了SpCactus基因全長(zhǎng),并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、理化性質(zhì)預(yù)測(cè),初步探討了其生物學(xué)功能,為進(jìn)一步研究其在免疫反應(yīng)中的生物學(xué)功能提供參考依據(jù)。
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