鱖腦神經(jīng)元的原代培養(yǎng)與鑒定
關(guān)鍵詞：鱖 腦 神經(jīng)元細(xì)胞 原代培養(yǎng)
摘要：目前魚類神經(jīng)細(xì)胞模型極少,物種間的差異性使鱖在細(xì)胞水平上的研究具有極大的局限性,為建立一種簡單易行的鱖腦神經(jīng)元細(xì)胞模型進(jìn)一步研究鱖神經(jīng)系統(tǒng),本實(shí)驗(yàn)取3月齡鱖,聯(lián)合膠原酶消化法和機(jī)械吹打法分離出鱖腦細(xì)胞,用含20%FBS的L15培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液接種在細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi),于28°C無CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),3 d后更換培養(yǎng)基,待細(xì)胞貼壁長滿瓶底后進(jìn)行傳代培養(yǎng);采用Neu-N和β-tubulin免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)鑒定鱖腦細(xì)胞神經(jīng)元純度。結(jié)果顯示,鱖腦細(xì)胞分離培養(yǎng)2 d后貼壁狀態(tài)較好,隨著時(shí)間延長,貼壁細(xì)胞增多,細(xì)胞突起相互連接,培養(yǎng)5 d后神經(jīng)元胞體豐滿,細(xì)胞數(shù)量明顯增多,突起相互間形成了明顯的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。經(jīng)Neu-N和β-tubulin免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)鑒定鱖腦神經(jīng)元細(xì)胞純度可達(dá)95%以上。研究表明,該鱖腦細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法簡單易行,且可獲得高純度的鱖腦神經(jīng)元細(xì)胞。
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