載pVAX1/TatPTD-endostatin殼聚糖納米基因載體的構(gòu)建與體外活性評價
關鍵詞：殼聚糖 納米基因載體 基因治療
摘要：目的構(gòu)建載重組表達質(zhì)粒pVAX1/TatPTD-endostatin殼聚糖納米基因載體并評價其抑制內(nèi)皮細胞增殖的活性。方法 選用真核表達質(zhì)粒pVAX1為重組載體,采用PCR及雙酶切法制備能夠表達TatPTD-endostatin融合蛋白的真核表達載體pVAX1/TatPTD-endostatin;離子交聯(lián)法制備殼聚糖載基因納米粒,瓊脂糖凝膠電泳篩選處方,檢測納米粒的形態(tài)、Zeta電位及粒徑;采用最佳處方比例制備載重組質(zhì)粒納米載體,轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC,采用ELISA法測定分泌型TatPTD-Es蛋白的表達量,CCK-8測定對HUVEC的抑制作用,以上兩個實驗均以LipofectaminTM2000為陽性對照。結(jié)果 pVAX1/TatPTD-endostatin的真核表達載體構(gòu)建成功,殼聚糖納米粒粒徑（145±12）nm,Zeta電位（14.3±1.6）mV,納米粒轉(zhuǎn)染HUVEC后細胞上清中TatPTD-endostatin的濃度為（182.5±16.3）ng/mL,殼聚糖基因載體轉(zhuǎn)染HUVEC后對細胞有明顯的抑制作用,72h的抑制率達（53.4±5.4）%。結(jié)論 構(gòu)建的殼聚糖納米基因載體能夠成功轉(zhuǎn)染HUVEC并能明顯地抑制細胞的增殖。
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