銀鯽Greb1的克隆、表達(dá)及功能研究
關(guān)鍵詞：銀鯽 greb1 垂體發(fā)育 激素
摘要：為研究銀鯽(Carassius gibelio)雌激素應(yīng)答基因(Growth regulation by estrogen in breast cancer cell 1,Greb1)的表達(dá)特征和功能,采用RACE方法克隆了銀鯽Greb1的全長cDNA(CgGreb1)。CgGreb1的cDNA全長為954 bp,其中包含一個(gè)765 bp的開放閱讀框,編碼255個(gè)氨基酸。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有多個(gè)Greb1的變體,長度為386—1988個(gè)氨基酸,其中CgGreb1是最短的一個(gè)。序列比對結(jié)果表明脊椎動(dòng)物Greb1蛋白的N端區(qū)域極為保守,且CgGreb1位于Greb1蛋白的N端區(qū)域,該區(qū)域與其他脊椎動(dòng)物Greb1的同源性超過60%。qRT-PCR結(jié)果顯示,在成體組織中,CgGreb1主要在垂體、腦、性腺和肝臟中表達(dá),其中在垂體中CgGreb1的表達(dá)最高;在注射促黃體生成素釋放激素類似物和人絨毛膜促性腺激素后的雌魚垂體中,CgGreb1的表達(dá)逐漸上升隨后降低,并在產(chǎn)卵時(shí)維持較高的表達(dá);在胚胎發(fā)育過程中,CgGreb1從50%外包開始表達(dá),其表達(dá)量隨胚胎發(fā)育而升高,在受精后24h達(dá)到峰值,隨后表達(dá)量下降,在受精后48h不表達(dá)。原位雜交結(jié)果表明,在原腸期,CgGreb1信號位于胚層的邊緣;在體節(jié)期,CgGreb1信號逐漸增強(qiáng)并出現(xiàn)在神經(jīng)系統(tǒng);在受精后24h,CgGreb1信號在腦和脊髓等中樞神經(jīng)系統(tǒng)增強(qiáng);從受精后30h開始,CgGreb1信號減弱;在受精后48h,檢測不到CgGreb1信號。在注射CgGreb1 MO的銀鯽胚胎中,tshβ、prl和gthα分別標(biāo)記的3種垂體細(xì)胞減少,證明CgGreb1參與早期銀鯽垂體細(xì)胞的發(fā)育。研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示銀鯽垂體發(fā)育和生長調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
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