高表達(dá)抗PD-1單克隆抗體細(xì)胞株工藝開(kāi)發(fā)的研究
關(guān)鍵詞：單克隆抗體 細(xì)胞株 工藝開(kāi)發(fā)
摘要：以PD-1分子為靶點(diǎn),以中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞為宿主,構(gòu)建高表達(dá)抗PD-1單克隆抗體的細(xì)胞株,優(yōu)化細(xì)胞株篩選工藝,優(yōu)化工藝參數(shù),得到穩(wěn)定高表達(dá)PD-1細(xì)胞株。運(yùn)用懸浮細(xì)胞CHO表達(dá)抗PD-1的抗體,首先在質(zhì)粒構(gòu)建中,將重鏈和輕鏈插到同一個(gè)載體上,保證了重鏈和輕鏈的比例為1∶1,實(shí)現(xiàn)共表達(dá),輕重鏈在一個(gè)載體上,再同PD-1基因共轉(zhuǎn)染,對(duì)后面的基因擴(kuò)增篩選提供基礎(chǔ)。采用懸浮培養(yǎng),使用化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基CD培養(yǎng)基,支持重組CHO細(xì)胞的生長(zhǎng),達(dá)到高密度培養(yǎng),從而得到高表達(dá)蛋白。結(jié)果表明蛋白表達(dá)量穩(wěn)定性分析表明,篩選出兩株表達(dá)量較高的細(xì)胞株,表達(dá)量分別達(dá)到2.03g/L和2.09g/L,為抗PD-1抗體的生產(chǎn)提供了穩(wěn)定高產(chǎn)的細(xì)胞系。得到了穩(wěn)定高表達(dá)PD-1細(xì)胞株,且蛋白質(zhì)量與原研藥一致。
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