基于納米抗體CDR3區(qū)抗原表位展示制備生存素抗體及其鑒定
關(guān)鍵詞：納米抗體 生存素 表位 抗體制備 鑒定
摘要：目的:通過納米抗體CDR3區(qū)展示生存素N端表位的方式,探索納米抗體在抗原表位展示中的作用。方法:通過基因合成方法將生存素N端起始表位(氨基酸序列1~15)插入納米抗體CDR3區(qū),再構(gòu)建到原核表達(dá)載體pET24a中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),用帶His標(biāo)簽的填料純化,獲得高純度的目的蛋白,免疫雌性BALB/c小鼠,間接ELISA檢測5次免疫后的效價(jià),用抗原偶聯(lián)純化介質(zhì)純化免疫多抗,Western印跡檢測多抗特異性。結(jié)果:IPTG誘導(dǎo)后,目的蛋白主要以包涵體形式存在,親和層析獲得純度大于96%的目的蛋白,包涵體經(jīng)復(fù)性后免疫小鼠,效價(jià)可達(dá)1∶512000,West?ern印跡特異性檢測顯示免疫多抗能夠特異性結(jié)合生存素。結(jié)論:納米抗體CDR3區(qū)生存素抗原N端表位展示的方法可用于抗生存素抗體的制備,并為今后納米抗體表位展示相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
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