樹鼩大腦皮層少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的分離鑒定
關(guān)鍵詞：大腦皮層 原代細(xì)胞培養(yǎng) 分離純化 樹鼩
摘要：目的建立樹鼩大腦皮層少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPCs)的體外分離、原代培養(yǎng)方法,以及鑒定技術(shù)。方法新生48 h內(nèi)給樹鼩施行安死術(shù)后采集大腦,去除腦膜和腦干,留下大腦皮層,然后使用胰酶和DNase I聯(lián)合消化大腦皮層,分離細(xì)胞原代培養(yǎng)。通過采用化學(xué)分離法和差速貼壁法從原代培養(yǎng)中獲得較為純化的OPCs。對純化和定向分化的細(xì)胞分別進(jìn)行硫酸軟骨素蛋白多糖4(NG2)、髓鞘堿性蛋白(MBP)細(xì)胞免疫熒光染色鑒定。結(jié)果純化后的OPCs,胞體圓形或橢圓形,折光性強(qiáng),有兩極或三極突起,經(jīng)NG2細(xì)胞免疫熒光染色,細(xì)胞純度達(dá)97%左右。加入分化培養(yǎng)液后,OPCs可分化發(fā)育成熟,經(jīng)MBP細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。結(jié)論成功建立了樹鼩大腦皮層OPCs的體外分離純化培養(yǎng)方法。
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