增加雷斯青霉15α-羥化酶基因拷貝數(shù)提高甾體轉(zhuǎn)化效率
李雪龍; 李改; 謝東奇; 金鵬; 毛淑紅; 王正祥; 劉曉光 天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院; 天津300457; 天津科技大學(xué)化工與材料學(xué)院; 天津300457
關(guān)鍵詞：雷斯青霉 孕二烯酮 左旋乙基甾烯雙酮
摘要：孕二烯酮是第三代高效避孕藥的主要成分.雷斯青霉(Penicillium raistrickii)ATCC10490催化甾體左旋乙基甾烯雙酮的C15α–羥基化反應(yīng)合成孕二烯酮的重要中間體C15α–羥基左旋乙基甾烯雙酮.為了提高現(xiàn)有生產(chǎn)菌種的轉(zhuǎn)化效率,本文研究了在雷斯青霉ATCC10490中增加甾體C15α–羥化酶基因(PRH)拷貝數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響.分別構(gòu)建了PRH基因的誘導(dǎo)型和組成型過表達(dá)載體pPZP-p800-PRH和pPZP-TrpC-PRH,并通過同源重組的方法定點(diǎn)整合到雷斯青霉基因組.轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)表明,在出發(fā)菌株中增加一個(gè)PRH基因拷貝顯著提高了甾體左旋乙基甾烯雙酮轉(zhuǎn)化效率,重組菌PRH-P800和PRH-TrpC的摩爾轉(zhuǎn)化率分別提高了13%和20%,同時(shí)轉(zhuǎn)化時(shí)間均縮短了12h.
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