日本結(jié)縷草ZjNOL基因的克隆及轉(zhuǎn)錄自激活檢測(cè)
關(guān)鍵詞：日本結(jié)縷草 nol基因 轉(zhuǎn)錄自激活 生物信息學(xué)
摘要：NYC1-like(NOL)編碼的短鏈氧化還原酶是葉綠素b降解的必需酶。對(duì)日本結(jié)縷草(Zoysia japonica)ZjNOL基因全長(zhǎng)克隆結(jié)果顯示,該基因開放閱讀框?yàn)?81個(gè)核苷酸,編碼327個(gè)氨基酸。生物學(xué)分析顯示,ZjNOL蛋白與高粱(Sorghum bicolor)中的NOL蛋白的親緣關(guān)系最近。利用pGBKT7載體,通過DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建pGBKT7-ZjNOL酵母表達(dá)載體,通過PEG介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法,成功導(dǎo)入Y2HGold酵母中,自激活檢測(cè)顯示含有pGBKT7-ZjNOL的Y2HGold酵母細(xì)胞能夠在SD/-Trp培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng),而在SD/-Trp/AbA培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng),也不能在含有X-α-Gal培養(yǎng)基顯藍(lán)色,證明ZjNOL蛋白沒有自激活活性。生物信息學(xué)分析及轉(zhuǎn)錄自激活檢測(cè)有助于深入研究ZjNOL基因功能,為延長(zhǎng)結(jié)縷草綠期,改善結(jié)縷草坪用質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。
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