一種側流試紙結合FAM重組酶聚合酶擴增(RPA)診斷布魯氏菌感染的方法
葛志毅; 周建華; 尚佑軍; 李學瑞; 劉永生; 趙鷺; 孫晶晶; 曹小安 中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室; 蘭州730000
關鍵詞：布魯氏菌 rpa 側流試紙 田間檢測
摘要：目的為了更加方便布魯氏菌病(布病)檢測,增加布病檢測方法的多樣性。方法根據布魯氏菌特異基因的保守序列,設計引物與探針,利用Twist Amp? nfo試劑盒提供的聚合酶擴增體系對布魯氏菌基因組進行快速等溫擴增,擴增產物用PCRD試劑盒側流試紙進行檢測,進而判斷結果。其實驗過程為確定最佳反應條件,檢測特異性和敏感性,并與QPCR同時檢測樣品,比較符合率。結果 38℃反應10 min為最佳條件,特異性結果良好,敏感性能達到10-5(8拷貝),與QPCR檢測結果符合率高,以此建立本方法。結論該方法具有特異性強、敏感性好、操作過程簡單、檢測快速等優(yōu)點,增加了布病檢測方法的多樣性,同時為野外田間布病的檢測提供了一種可能。
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