生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的鑒定及耐藥分子特征研究
關(guān)鍵詞：生鮮乳 金黃色葡萄球菌 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 耐藥質(zhì)粒
摘要：為了解生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌(S.aureus)的污染及耐藥情況,研究其耐藥的分子特征,本研究利用國(guó)標(biāo)法分離了來(lái)自浙江杭州市某奶牛場(chǎng)99份生鮮乳中的S.aureus,通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)進(jìn)行鑒定,對(duì)其進(jìn)行質(zhì)譜聚類分析和16S r DNA系統(tǒng)發(fā)育分析,采用微量肉湯稀釋法測(cè)定其最小抑菌濃度(MIC),利用Illlumina Hi Seq 4000平臺(tái)對(duì)其進(jìn)行全基因組測(cè)序,通過Res Finder數(shù)據(jù)庫(kù)分析其耐藥基因,利用EasyFig和BRIG軟件進(jìn)行耐藥質(zhì)粒比對(duì)分析。結(jié)果顯示在99份生鮮牛乳中共分離到5株S.aureus (5.1%),其質(zhì)譜聚類和16S r DNA系統(tǒng)發(fā)育分析樹形具有較高一致性。發(fā)現(xiàn)兩株耐甲氧西林S.aureus (MRSA) SABHZ053和SABHZ079,且其多位點(diǎn)序列分型(MLST)同為ST965,其中菌株SABHZ079對(duì)青霉素、紅霉素、克林霉素、頭孢西丁、氧氟沙星、替米考星和慶大霉素7種抗生素耐藥。全基因組測(cè)序分析后顯示菌株SABHZ053和SABHZ079的染色體中均含有aph(3’)-III、ant(6)-Ia和mecA耐藥基因。菌株SABHZ053存在2個(gè)耐藥質(zhì)粒,pSA053-1 (4 439 bp)介導(dǎo)tet(K)對(duì)四環(huán)素類耐藥,pSA053-2 (34 609 bp)介導(dǎo)blaZ對(duì)青霉素耐藥。菌株SABHZ079有3個(gè)耐藥質(zhì)粒,其中pSABHZ079-1 (39 227 bp)與pSA053-2同源,但相對(duì)插入了Tn551-erm(B)-aph(2’’)-Ia轉(zhuǎn)座單元,可以介導(dǎo)其對(duì)大環(huán)內(nèi)脂類和慶大霉素的耐藥,質(zhì)粒pSABHZ079-2 (2 473 bp)介導(dǎo)erm(C)對(duì)大環(huán)內(nèi)脂類耐藥,而質(zhì)粒pSABHZ079-3(4 439 bp)與pSA053-1完全相同。另外,本研究顯示耐藥質(zhì)粒pSABHZ079-1可分為骨架I和II兩部分,可能分別由來(lái)自人源的pNTUH3874與pN315或其相似質(zhì)粒雜合而來(lái)。本研究揭示了該奶牛場(chǎng)生鮮乳中S.aureus耐藥性的分子特征,表明耐藥質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座元件是其耐藥性產(chǎn)生的重要因子,為奶牛場(chǎng)合理用藥和控制S.aureus的抗藥性提供重要參考。
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