人類線粒體肌酸激酶的固定化及酶學性質(zhì)研究
關鍵詞：酶類 固相 肌酸激酶 磷酸肌酸
摘要：目的人源肌酸激酶uMtCK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,開發(fā)固定化uMtCK酶法生成磷酸肌酸,實現(xiàn)其工業(yè)化應用價值。方法將異源表達的uMtCK固定在納米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制備固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK,并進行催化反應。與游離酶uMtCK比對酶學性質(zhì)和動力學參數(shù),測定固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的重復使用次數(shù)。結果與游離酶uMtCK相比,固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最適反應溫度提高5℃,最適pH降低0.5個單位,在50℃、pH7.5下孵育2h,殘余酶活為51%,而游離酶僅為27%;uMtCK的KmCr為10.7mmol/L,為Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的kcat/KmCr值是5.3L/(mmols),是uMtCK的1.3倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK在經(jīng)歷9次循環(huán)使用后,活力還能保持50%以上,顯示了良好的穩(wěn)定性和重復使用性。結論與uMtCK相比,Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK具有良好的熱穩(wěn)定性和重復使用性,具有一定的工業(yè)化價值。
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