副雞禽桿菌外膜蛋白抗體間接 ELISA檢測(cè)方法的建立
關(guān)鍵詞：副雞禽桿菌 抗原蛋白 p9 間接 elisa
摘要：副雞禽桿菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是雞傳染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可導(dǎo)致蛋雞產(chǎn)蛋率下降、從而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。副雞禽桿菌引起的癥狀與雞毒支原體等病原引起的其他上呼吸道傳染病非常相似,本試驗(yàn)利用副雞禽桿菌外膜蛋白,建立間接 ELISA 抗體檢測(cè)方法,用于血清抗體的檢測(cè)。通過(guò)分析副雞禽桿菌外膜蛋白HMTp210中較為保守的P9片段,將其進(jìn)行原核表達(dá)并純化,純化的P9蛋白免疫雞制備了抗血清。結(jié)果顯示,P9蛋白分子量62Ku,純度80%以上。以純化的蛋白P9作為包被抗原,采用棋盤(pán)滴定法確定了抗原最佳包被濃度為1μg/Ml、血清樣品最佳稀釋度為1∶100,作用時(shí)間為 60min;酶標(biāo)二抗的最佳稀釋濃度為1∶10000,最佳作用時(shí)間為 30min;底物顯色時(shí)間為15 min;陰、陽(yáng)性的判定值為0.3。按上述條件建立的間接ELISA方法可以檢測(cè)出P9蛋白免疫后的雞血清及三種血清型副雞禽桿菌的陽(yáng)性雞血清,與其他禽病病原體抗血清無(wú)交叉反應(yīng),本研究為檢測(cè)副雞禽桿菌血清抗體提供了一種新的方法。
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