人H5N1流感病毒M1基因的亞克隆及其在原核細胞的表達
陳愛珺; 郭建強; 姚立紅; 程從升; 劉曉宇; 付金奇; 徐鵬衛(wèi); 張智清 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所病毒基因工程國家重點實驗室; 北京100052
關(guān)鍵詞：流感病毒a型 基因 基因表達
摘要：目的 構(gòu)建人H5N1亞型禽流感病毒A/Anhui/1/2005 M1蛋白的原核表達系統(tǒng)，為進一步研究M1蛋白的生物學(xué)功能和制備其診斷試劑奠定基礎(chǔ)。方法 以該病毒基因節(jié)段七cDNA為模板，PCR擴增得到M1基因片段。將該片段亞克隆至載體pQE80-L中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pQE80-L/M1，轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21（ DE3）。IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達。金屬鎳離子螯合層析純化N末端攜帶多聚組氨酸標簽的重組M1蛋白，免疫小鼠制備多克隆抗體。結(jié)果 獲得了重組M1蛋白，能與抗H5N1亞型流感病毒血清發(fā)生特異性結(jié)合，且其免疫后能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性抗體。結(jié)論 成功獲得了人H5N1亞型禽流感病毒M1蛋白在原核細胞中高效表達。
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