CEA啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá)Hsp70基因的重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定
關(guān)鍵詞：重組 遺傳 熱休克蛋白質(zhì)70 cea啟動(dòng)子 腺病毒
摘要：目的構(gòu)建癌胚抗原（CEA）啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下靶向表達(dá)熱休克蛋白70（HspTO）基因的重組腺病毒。方法通過(guò)RT-PCR和PCR的方法分別擴(kuò)增人Hsp70基因和CEA啟動(dòng)子，構(gòu)建穿梭質(zhì)粒pDC316-pCEA—Hsp70。將所得的穿梭質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞獲得重組腺病毒Ad5-pCEA—Hsp70。通過(guò)梯度離心純化病毒，采用半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量測(cè)定病毒滴度。分別以重組的腺病毒感染CEA陽(yáng)性的人胰腺癌BxPC3細(xì)胞和CEA陰性的SWl990細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和ELISA法檢測(cè)Hsp70 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果酶切和測(cè)序證實(shí)Hsp70基因和CEA啟動(dòng)子成功插入PDC316質(zhì)粒。與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞獲得的病毒經(jīng)PCR擴(kuò)增證實(shí)重組腺病毒構(gòu)建成功。最終獲得的病毒顆粒數(shù)達(dá)2．2×10^11vp／ml，滴度為1．5X10^10PFU／ml。重組腺病毒感染CEA陽(yáng)性表達(dá)的BxPC3細(xì)胞后，可顯著增加Hsp70 mRNA和蛋白的表達(dá)，而感染CEA陰性的SWl990細(xì)胞，Hsp70mRNA和蛋白的表達(dá)無(wú)變化。結(jié)論成功構(gòu)建了能夠在CEA陽(yáng)性細(xì)胞中靶向表達(dá)Hsp70基因的重組腺病毒Ad5-pCEAHsp70，為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
中華胰腺病雜志要求:
{1}作者姓名、單位、職務(wù)、職稱及詳細(xì)聯(lián)系方式（地址、郵編、手機(jī)等）。署名作者不超過(guò)2人。
{2}稿件文責(zé)自負(fù)。依照《著作權(quán)法》規(guī)定，結(jié)合具體情況，編輯部有權(quán)對(duì)文章的文字做修改、刪節(jié)和加工。
{3}題目應(yīng)簡(jiǎn)明、具體、確切，能概括文章的特定內(nèi)容，一般不超過(guò)20個(gè)字。
{4}常用文獻(xiàn)類型及其標(biāo)識(shí)為：普通圖書[Ｍ]、會(huì)議錄[C]、匯編[G]、報(bào)紙[Ｎ]、期刊[Ｊ]、學(xué)位論文[Ｄ]、報(bào)告[R]、標(biāo)準(zhǔn)[S]、專利[P]、數(shù)據(jù)庫(kù)[DB]、計(jì)算機(jī)程序[CP]、電子公告[EB]，標(biāo)識(shí)位置緊跟文獻(xiàn)題名之后。
{5}摘要是文章主要論點(diǎn)的客觀陳述，要能概括文章的主要內(nèi)容或創(chuàng)新觀點(diǎn)，字?jǐn)?shù)為200字以上，避免以“本文研究了……，指出了……，本文認(rèn)為……”等形式表述。
注：因版權(quán)方要求，不能公開全文，如需全文，請(qǐng)咨詢雜志社
